Identificación de nuevos controles de carga de Western blot de esperma

La medición del grado de expresión de las proteínas desempeña una posición fundamental en cada investigación orgánica y médica. Las proteínas de mantenimiento, normalmente codificadas por genes de mantenimiento, se utilizan como proteínas de gestión de la carga para normalizar la expresión de proteínas.

Evidentemente, los requisitos de referencia correctos son importantes para una evaluación satisfactoria de la expresión proteica. Sin embargo, nuestra investigación confirmó que las proteínas de normalización ampliamente utilizadas, cuyos rangos de expresión se diversifican enormemente entre las muestras de esperma, han sido inadecuadas para la normalización del conocimiento.

Para descubrir las proteínas que se expresan de forma constante en el esperma, analizamos una serie de conocimientos impresos del transcriptoma del esperma. Se han elegido siete proteínas cuyos rangos de expresión han sido comparativamente seguros (valores de coeficiente de variación inferiores a 0,35) y se han evaluado adicionalmente mediante respuesta cuantitativa en cadena de la polimerasa en tiempo real, Western Blot (WB) e inmunocitoquímica.

Protein A protein
Fitzgerald
Protein A Protein
Abbexa
pLDH Protein Protein
Abbexa

Nuestros resultados confirmaron que, entre las muchas proteínas clásicas de mantenimiento de la casa, sólo la β-tubulina se mantuvo fija en las muestras de esperma de 85 personas. En contraste con otras proteínas clásicas de mantenimiento comparables a la gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa, la actina y la histona H3, la cullina-1 (CUL1) y la proteína 7 de la caja F (FBXO7) dieron la impresión de ser más apropiadas para su uso como controles internos para el análisis de proteínas del esperma.
Mezclado con los lugares de esas proteínas, CUL1 y FBXO7 han sido instruidos para su uso como una proteína de mantenimiento de la casa para las proteínas enteras.

Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
MagSi-WAX
AMSBIO
MagSi-WAX
AMSBIO

Tubulina o no tubulina: Hacia la tinción de proteínas completas como gestión de carga en Western Blots.

El Western blot es una técnica analítica ampliamente utilizada para detectar y (semi)cuantificar proteínas particulares en muestras dadas. Los Western blots son utilizados y desarrollados constantemente por el grupo de proteínas. Este artículo general se centra en una gran mejora, aunque no bien establecida, en relación con la gestión de la carga interna como requisito previo para cuantificar con precisión los Western blots.

100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-100BP CORNING
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-1KB CORNING
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.1 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio

En la actualidad, las proteínas de mantenimiento (HKP), como la actina, la tubulina o la GAPDH, se utilizan a veces para verificar la igualdad de carga o para compensar las posibles variaciones de carga. Sin embargo, esta gestión de la carga tiene una serie de inconvenientes. La tinción de la proteína completa en la membrana del blot ha surgido como una gestión de carga mayor.

La tinción de la proteína completa (TPS) representa la cantidad de carga precisa con mayor exactitud que las HKP debido a las pequeñas variaciones técnicas y orgánicas. Además, la amplia variación dinámica de la TPS resuelve la dificultad de las HKP, que generalmente no señalan las variaciones de carga por encima de pequeñas cantidades de carga de 0,5-10 μg.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
ranavirus PCR kit
Bioingentech

Aunque estas y otras ventajas vitales se han demostrado en los últimos 10 años, sólo una pequeña proporción de laboratorios se beneficia de ellas. El objetivo de este artículo general es reunir y evaluar los detalles sobre las opciones de TPS y pedir a los clientes que se replanteen su gestión de la carga utilizada.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1
Frit Kit
FRIT-KIT
Column Packing Kit
PACK-KIT

Se mencionan 9 ventajas del TPS y se evalúan críticamente 7 variantes totalmente diferentes mediante la valoración de los detalles técnicos. En consecuencia, este artículo general presenta una orientación para decidir el tipo de tinción adecuado. Concluyo que el TPS debe ser la gestión de carga popular en los futuros enfoques de Western blot.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier
Chicken thrombomodulin,TM ELISA KIT ELISA
QY-E80092 Qayee Biotechnology
Oxycodone ELISA
EK7130 BosterBio
Amphiphysin ELISA
LF-EK0189 Abfrontier

El uso de la tinción de proteínas enteras REVERT como gestión de la carga demuestra ventajas vitales sobre el uso de proteínas de mantenimiento de la casa cuando se analizan homogenados de la mente por Western blot: Una evaluación de muestras que representan estados hormonales gonadales totalmente diferentes.

El Western blot se utiliza de forma rutinaria para cuantificar las variaciones en los rangos de las proteínas objetivo en los tejidos. Las estrategias habituales suelen utilizar mediciones de proteínas de mantenimiento para regular las variaciones en la carga y el cambio de proteínas.

Esto es problemático, sin embargo, cuando las proteínas de mantenimiento de la casa también se ven afectadas por situaciones experimentales comparables a los daños, la enfermedad, y / o manipulaciones de la hormona gonadal. Nuestro objetivo era juzgar una técnica alternativa y tal vez superior para llevar a cabo la evaluación de Western blot de homogenados de tejido de la mente de las ratas con distintos estados fisiológicamente relacionados con la hormona gonadal.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier

Los tejidos se han recogido del hipocampo, la corteza frontal y el cuerpo estriado de ratas adultas jóvenes que han sido ovariectomizadas para simular la menopausia quirúrgica, o que han sido tratadas con la ovatotoxina 4-vinilciclohexeno-diepóxido (VCD) para simular la menopausia transitoria.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
Alpha Diagnostics
Frit Kit
Next Advance
Column Packing Kit
Next Advance

Además, se recogieron tejidos de ratas con un ciclo estral tradicional sacrificadas en el proestro, cuando los niveles de estradiol son excesivos, y en el diestro, cuando los niveles de estradiol son bajos. Se llevó a cabo la detección por Western blot de α-tubulina, β-actina y GAPDH, y se contrastó su sensibilidad y fiabilidad con una tinción de proteína completa fluorescente (REVERT).

 Identifying new sperm Western blot loading controls

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

Los resultados muestran que la tinción de la proteína completa era mucho menos variable a través de las muestras y tenía una mayor variación lineal que la α-tubulina, la β-actina o la GAPDH. La tinción fue segura y sencilla de utilizar, y no intervino en la inmunodetección ni en la detección multiplexada de las proteínas de mantenimiento.

Además, presentamos que la normalización de nuestros conocimientos a toda la proteína, sin embargo a no GAPDH, reveló variaciones vitales en la expresión de α-tubulina dentro del hipocampo como un rendimiento de remedio, y que la consistencia de gel a gel en la medición de las variaciones entre las muestras emparejadas ejecutar en un número de geles fue considerablemente mayor cuando los conocimientos se han normalizado a toda la proteína que cuando se normaliza a GAPDH.

Estos resultados revelan que la tinción de proteína entera REVERT puede utilizarse en la evaluación de Western blot de homogeneizados de tejido mental para regular las variaciones en la carga y el cambio de proteína, y da beneficios vitales sobre el uso de proteínas de mantenimiento para cuantificar las modificaciones dentro de los rangos de un número de proteínas de la meta.
Una gestión de carga aplicable para la evaluación de western blot en fashions animales de infarto isquémico de miocardio.
Una gestión de carga aplicable es importante para la evaluación por Western blot. Las proteínas de mantenimiento (HKP), comparables a la β-actina, la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y la β-tubulina, se utilizan generalmente para normalizar la expresión de las proteínas.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

Sin embargo, la expresión de HKP puede verse afectada por determinadas situaciones experimentales, como el infarto de miocardio isquémico. Esta investigación se llevó a cabo para buscar una gestión de carga aplicable para la evaluación de western blot del miocardio isquémico.

El infarto isquémico de miocardio se indujo mediante la ligadura de la arteria coronaria descendente anterior (LAD) en monos Rhesus y ratones C57BL/6. Las muestras de tejido intestinal de zonas y factores de tiempo totalmente diferentes después del procedimiento quirúrgico se han sometido a tinción western blot o en gel. Se ha examinado la extensión de β-actina, GAPDH, β-tubulina y la proteína completa.

El grado de proteína global fue constante en todos los equipos, mientras que el grado de proteína de β-tubulina y β-actina han sido totalmente diferentes en todos los equipos. No obstante, el grado de proteína de GAPDH fue seguro dentro del maniquí del mono Rhesus. Llegamos a la conclusión de que la proteína entera era esencialmente la más aplicable dentro de la gestión en varias fases de la enfermedad isquémica del miocardio de fashions animales variados. GAPDH es una gestión interior fiable sólo para el miocardio isquémico del mono Rhesus.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
Biotium

Fuentes :

  1. NCBI
  2. Gentaur

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