Mejora de la detección de la proteína Gag p24 del VIH mediante un método combinado de inmunoprecipitación y ELISA digital

Más del 90% de los provirus del VIH-1 se consideran defectuosos e incapaces de replicarse. Mientras que los provirus competentes para la replicación son la principal preocupación con respecto al desarrollo o la transmisión de la enfermedad, las investigaciones han demostrado que incluso los provirus defectuosos no son silenciosos y pueden producir proteínas virales, que pueden contribuir a la irritación y a las respuestas inmunitarias.

La expresión de proteínas virales también tiene implicaciones para los métodos de eliminación del VIH-1 basados en la inmunidad, que dependen del reconocimiento de antígenos. Por lo tanto, se necesitan ensayos delicados orientados a cuantificar tanto los provirus competentes para la replicación como los provirus defectuosos, pero competentes desde el punto de vista de la traducción, para comprender la contribución de las proteínas víricas a la patogénesis del VIH-1 y decidir la eficacia de las intervenciones terapéuticas contra el VIH-1.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
Biotium

Anteriormente, informamos de un ensayo inmunoenzimático digital modificado del VIH-1 gag p24 con detección de matriz de molécula única (Simoa) de la proteína viral asociada a las células. Aquí informamos de una novedosa técnica de enriquecimiento de la proteína p24 acoplada al inmunoensayo digital para alargar adicionalmente la sensibilidad y especificidad de la detección de la proteína viral.

La inmunocaptura de la proteína gag p24 del VIH adoptada por la elución en un formato compatible con Simoa dio como resultado un aumento de la restauración de la proteína y una disminución del fondo a partir de diversas matrices orgánicas y volúmenes de patrones. Aquí se demuestra la cuantificación de tan sólo 1 fg de proteína p24 a partir de lisados celulares de células extraídas de la sangre periférica o de tejidos de contribuyentes al VIH suprimidos por la terapia antirretroviral, además de primates no humanos infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana (NHP), con una restauración y reproducibilidad excesivas.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

La aplicación de estas estrategias mejoradas a las muestras derivadas de pacientes tiene el potencial de aumentar la investigación del estado persistente del VIH y estudiar la respuesta in vitro a las terapias, además de la investigación ex vivo de las células competentes para la traducción de una amplia gama de donantes.
Medición del reservorio de VIH inducible y competente para la replicación utilizando una lectura de p24 extremadamente delicada, el ensayo de crecimiento viral ELISA digital
La cuantificación del reservorio inducible del VIH proporciona una estimación de la frecuencia de las células infectadas por el VIH quiescentes en las personas, además de en los animales, y puede ayudar a verificar la eficacia de los agentes de reversión de la latencia (LRA). El ensayo cuantitativo de crecimiento viral (QVOA) se utiliza para medir la replicación inducible del VIH y generar estimaciones de la dimensión del reservorio.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

Sin embargo, el QVOA convencional requiere mucho tiempo y trabajo, así como grandes cantidades de linfocitos. Dada la importancia de la evaluación correcta y reproducible de la dimensión del reservorio y del ejercicio de la ERS en los métodos de tratamiento, los esfuerzos para racionalizar el QVOA son de gran importancia.

Hemos desarrollado un QVOA modificado, el ensayo Digital ELISA Viral Outgrowth o DEVO, con una lectura de p24 ultrasensible, capaz de detectar la proteína p24 del VIH en femtogramos, a diferencia de las limitaciones en picogramos del ELISA convencional. Para cada ensayo DEVO, se colocan 8-12 × 106 células T CD4 + en reposo de contribuyentes VIH + avíricos y tratados con ART en dilución limitante y se estimulan al máximo con PHA, IL-2 y PBMC alogénicas irradiadas no infectadas.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier

Se añaden a los cultivos blastos de PHA depletados de CD8 de un donante no infectado o células permisivas al VIH (por ejemplo, Molt4/CCR5) y se deja que el virus se amplifique durante 8-12 días. El p24 del VIH del sobrenadante de la tradición se mide en el octavo día mediante el ensayo Simoa (single molecule array, ultra-sensitive p24 assay) y se confirma en el día 12, y se calculan los modelos infecciosos por millón de células T CD4 + (IUPM) utilizando la técnica de máxima probabilidad.

En todos los ensayos DEVO realizados, el VIH p24 se detectó en el sobrenadante de los cultivos a partir del octavo día de estimulación. Es importante destacar que los valores de IUPM de DEVO en el día ocho fueron comparables o mayores que los valores de IUPM de QVOA convencionales obtenidos en el día 15.

Curiosamente, los valores IUPM de DEVO habían sido comparables con o sin la adición de blastos alogénicos CD8-depletados de la meta PHA o células permisivas del VIH históricamente utilizadas para aumentar el virus. El ensayo DEVO utiliza menos células T CD4 + en reposo y proporciona una evaluación de la dimensión del reservorio en mucho menos tiempo que el QVOA habitual.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier
Chicken thrombomodulin,TM ELISA KIT ELISA
QY-E80092 Qayee Biotechnology
Oxycodone ELISA
EK7130 BosterBio
Amphiphysin ELISA
LF-EK0189 Abfrontier

Este ensayo ofrece una nueva plataforma para cuantificar la replicación del VIH competente a través de la disponibilidad de células restringidas. Otros usos potenciales incluyen la evaluación del ejercicio de la ARL y la medición de la eliminación de las células contaminadas a través de ensayos de eliminación de la latencia.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
ranavirus PCR kit
Bioingentech

Conjugación química de amina-aldehído en una base ELISA de poliestireno con hidróxido de potasio para la nanosensibilización de un antígeno del VIH-p24.

El ensayo inmunoenzimático (ELISA) se ha utilizado ampliamente para la vigilancia de enfermedades y el cribado de fármacos como resultado de su precisión y sensibilidad comparativamente mayores. El ajuste fantástico del ELISA es necesario para elevar la detección precisa de biomoléculas a una abundancia decreciente.

Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
MagSi-WAX
AMSBIO
MagSi-WAX
AMSBIO

Improved Detection of HIV Gag p24 Protein Using a Combined Immunoprecipitation and Digital ELISA Method

En dirección a este fin, el aumento del agarre molecular en el suelo de poliestireno (PS) ELISA es esencial para la detección respetuosa con el medio ambiente, y podría lograrse mediante la inmovilización de las moléculas dentro de la orientación adecuada. Es extremadamente difícil inmovilizar las moléculas de proteína en un método bien alineado en un suelo ELISA como resultado de las variaciones de coste.

Protein A protein
Fitzgerald
Protein A Protein
Abbexa
pLDH Protein Protein
Abbexa

Empleamos una técnica química de 3-(aminopropil) trietoxisilano (APTES) y glutaraldehído (GLU) acoplada al suelo de PS para revelar la excesiva eficacia con ELISA. Se descubrió que una terapia de hidróxido de potasio adoptada por una proporción igual de APTES y GLU acoplada al 1% era óptima, y una incubación prolongada con GLU favorecía la mayor sensibilidad.

El p24 es un importante antígeno de secreción temprana para el diagnóstico del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), y se ha utilizado para la detección ecológica con la química anterior. Se adoptaron tres procedimientos completamente diferentes, que por lo general condujeron a la detección mejorada del antígeno VIH-p24 a 1 nM, que es un grado 30 veces mayor en comparación con un suelo ELISA estándar.

100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-100BP CORNING
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-1KB CORNING
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.1 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio

La funcionalización química del suelo demostrada aquí muestra además la siguiente especificidad con suero humano y VIH-TAT. El método anterior con la química de suelo diseñada también es beneficioso para el pronóstico de enfermedades en diferentes superficies de detección que implican la interacción de la sonda y el analito en muestras de control heterogéneas.

Desarrollo de un nuevo sistema ELISA de p24 recombinante para el diagnóstico del virus de la leucemia bovina en suero y leche.

El virus de la leucemia bovina (BLV) es un retrovirus que causa la leucosis bovina enzoótica. Aquí diseñamos un ensayo inmunoenzimático (ELISA) para detectar anticuerpos contra la proteína p24 de la cápside del BLV (codificada por el gen gag) en muestras de suero bovino.

El gen p24 se insertó en un sistema de expresión de Escherichia coli y se purificaron las proteínas recombinantes (GST-p24, p24 e His-p24). His-p24 fue esencialmente el antígeno más apropiado para utilizarlo dentro del ELISA. El nivel de corte se calculó a partir de una curva de atributos de trabajo del receptor derivada de un conjunto de 582 muestras de sujetos que previamente habían sido examinados de forma constructiva o desfavorable por BLV-CoMo-qPCR-2, que detecta el provirus de BLV.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1
Frit Kit
FRIT-KIT
Column Packing Kit
PACK-KIT

 

El nuevo ELISA de p24 confirmó casi la misma especificidad y sensibilidad que un equipo ELISA industrial de gp51 cuando se utilizó para comprobar las muestras de suero de los sujetos, y permitió el seguimiento de los anticuerpos de p24 en la leche cruda y el suero.

La evaluación de los resultados del ELISA de p24 y del ELISA de gp51 reveló que los anticuerpos de p24 se habían detectado antes que los anticuerpos de gp51 en tres de los ocho terneros contaminados experimentalmente con BLV, lo que indica una mejor detección sin disminuir el serodiagnóstico de BLV. Así pues, el ELISA p24 es un ensayo sólido y fiable para detectar anticuerpos contra el VLB en el suero o la leche, por lo que es una gran herramienta para el cribado del VLB a gran escala.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
Alpha Diagnostics
Frit Kit
Next Advance
Column Packing Kit
Next Advance

Fuentes :

  1. NCBI
  2. Gentaur

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